ADPG焦磷酸化酶(AGP)測試盒微量法

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商品屬性：

測定意義：

AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸與 ATP 反應生成淀粉合成的直接 前體 ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。

測定原理

AGP 催化的逆向反應生成 G1P，在反應體系中添加的磷酸己糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫 酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH，340nm 下測定 NADPH 增加速率，即可計算 AGP 活性。

需自備的的儀器和用品

紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、 研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存;

試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 9mL 蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝 后-20℃保存，禁止反復凍融；

試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 4mL 蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝 后-20℃保存，禁止反復凍融；

粗酶液制備 按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

訂購流程:

1、訂購前,請與銷售員核對產品中文名稱/CAS號/英文名稱等。

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5、我司提供完善的售后服務,使用過程中如有任何疑問,可提供技術指導。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 340nm，蒸餾水調零。

2、試劑一置 30℃保溫 10min 以上。

3、在 EP 管中按順序加入下列試劑

試劑名稱（μL） 測定管

試劑一 50

試劑二 80

樣本 10

混勻，30℃保溫 15 min，置沸水浴中 1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴迅速冷卻后，4000g4℃

離心 5min，取上清液，在 96 孔板中依次加入下列試劑

上清液 80

試劑一 85

試劑三 35

混勻后，立即于 340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，計算ΔA=A2-A1。

AGP 活性計算

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下：

1、按樣本蛋白蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1nmol NADPH 定義為一個酶活性單位。

AGP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷(V 樣×Cpr) ÷T×稀釋倍數=2813×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

2、按照樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

AGP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T×稀釋倍數=2813×ΔA÷W

V 反總：反應體系總體積，2×10-4

L；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103L / mol /cm；d：

比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：

反應時間，2 min；稀釋倍數：1.75；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量。

b.使用 96 孔板測定的計算公式如下：

1、按樣本蛋白蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1nmol NADPH 定義為一個酶活性單位。

AGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷(V 樣×Cpr) ÷T×稀釋倍數=5627×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

2、按照樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

AGP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T×稀釋倍數=5627×ΔA÷W

V 反總：反應體系總體積，2×10-4

L；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103L / mol /cm；d：

96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：

反應時間，2 min；稀釋倍數：1.75；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量。

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據實驗目的和檢測對象選擇合適的試劑盒，確保實驗的準確性和可靠性。

嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作，避免誤用或浪費。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存，避免陽光直射、高溫或潮濕等不利因素。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件，如溫度、時間、pH值等，以確保實驗結果的穩定性。

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