兔原代主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基

兔原代主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持兔原代主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含兔原代主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無(wú)需添加任何成分，可直接用于兔原代主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，寫(xiě)上細(xì)胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

T-細(xì)胞可誘導(dǎo)共刺激分子(ICOS)重組蛋白 Recombinant Inducible T-Cell Co Stimulator (ICOS)

IRAK4 Protein Human 重組人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

LIF重組小鼠 LIF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CD2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

GABARAPL1重組人 ATG8 / GABARAPL1 蛋白 Protein

人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶(TACE/ADAM17)ELISA 試劑盒

Human ue insulin (TI) ELISA Kit 人真胰島素(TI)試劑盒

HumanHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit 人熱休克蛋白20(HSP-20)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanhiston-H2b試劑盒人組蛋白H2b(histon-H2b)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-2)活性比色法定量試劑盒20次

Humanlowdensitylipoprotein，LDLELISAKit人低密度脂蛋白(LDL)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人粘蛋白6(MUC6)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human MUC6 (Mucin 6) ELISA Kit

人肌球蛋白結(jié)合蛋白C(MYBPC3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human MYBPC3 (Myosin Binding Protein C, Cardiac) ELISA Kit

人肌球蛋白重鏈10(MYH10)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human MYH10 (Myosin Heavy Chain 10, Non Muscle) ELISA Kit

人肌球蛋白重鏈9(MYH9)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human MYH9 (Myosin Heavy Chain 9, Non Muscle) ELISA Kit

豚鼠白介素4(IL-4)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human cytochrome P450c21A/21- hydroxylase (CYP21A) ELISA Kit 人細(xì)胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)試劑盒

HumanMousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 人髓過(guò)氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumancyclophilinB,CyPB試劑盒人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CyPB)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織HCK激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人抗副流感病毒IgG抗體(ai-PIVIgG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

丙酮酸脫氫酶E1β亞基抗體

鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白8抗體

兔原代主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基CHEK1重組小鼠 CHK1 / CHEK1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱγ(CAMK2γ)重組蛋白 Recombinant Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Gamma (CAMK2g)

BCL2L12重組人 BCL2L12 / BCL2-like 12 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

IRAK4 Protein Human 重組人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

CXCL12 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌、無(wú)污染，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè)。